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麥?zhǔn)媳葷峁芄烙嫅乙褐械募?xì)菌濃度

發(fā)布時間:2019-12-02    瀏覽次數(shù):16250

在我們?nèi)粘5奈⑸餀z測工作和進(jìn)行的某些實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)常會遇到需要預(yù)估細(xì)菌懸液的細(xì)菌濃度問題,有時候我們需要精確計數(shù)細(xì)菌菌液濃度,會用到血球計數(shù)板來進(jìn)行計數(shù);但有時我們只需要一個比較粗略的估計值即可,這里小編推薦大家使用麥?zhǔn)媳葷岱ā?/p>

麥?zhǔn)媳葷峁?/span>是McFarland發(fā)明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)濁度管。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的,有表可查,這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同,且都有定值。麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔热缦拢?/p>

這是傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁艿呐渲品椒?,目前也有市售的商品化產(chǎn)品,不需要自己配制,并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥?zhǔn)媳葷峁埽c傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁芟啾?,保存時間更長也更穩(wěn)定。但麥?zhǔn)媳葷峁芫唧w應(yīng)該怎么使用呢?

麥?zhǔn)媳葷峁芄烙嫅乙褐械募?xì)菌濃度具體操作方法

1、輕搖標(biāo)準(zhǔn)試管。

2、無菌操作將被測定的肉湯培養(yǎng)物加到與標(biāo)準(zhǔn)管相同直徑(大?。┑臒o菌試管中。

3、以無菌操作向被測定試管加入無菌生理鹽水(NaCl),直到濃度與所要求的標(biāo)準(zhǔn)管的濃度相同。

4、直接用眼睛看(需要經(jīng)驗(yàn),誤差較大)。

5、找張白紙,打上平行直線,然后觀察讀數(shù)(如圖示,利用光在不同濃度液體折射不同)。

例如,需配大約100cfu/mL 的細(xì)菌菌液濃度:

1. 無菌操作用接種環(huán)挑取測試細(xì)菌的純培養(yǎng)物到盛有一定量無菌生理鹽水管中,混懸。

2. 以比色卡作為背景目測,直到濁度與0.5 麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)管的濁度相一致,如上圖所示。

3. 0.5 號麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管相當(dāng)于1×108CFU/mL 濃度,以此為參照值,取1mL 濁度跟0.5 號麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管相一致的菌懸液到9mL 無菌生理鹽水管中,作10 倍梯度稀釋107、106、105……,102 稀釋度含菌量大約為100cfu/mL。

注:1. 測試菌的純培養(yǎng)物可以是凍干菌株復(fù)蘇后純培養(yǎng)物。

       2.本法僅供細(xì)菌液濃度的粗略計算。

注意事項(xiàng):

1、如果測定的肉湯培養(yǎng)物不澄清,由培養(yǎng)物的值減去未接種培養(yǎng)基的值來校正細(xì)菌濃度。

2、如果肉湯顏色很深,把未接種試管放在標(biāo)準(zhǔn)管的后面讀數(shù)即可。

3、測定好的細(xì)菌,最好做一下梯度稀釋涂布計數(shù)。

4、此種方法測定的準(zhǔn)確性不是很高,如果是對細(xì)菌數(shù)量要求較精確的,請用紫外分光光度計。

5、麥?zhǔn)媳葷嵋簯?yīng)放室溫暗處保存,用前混勻,有效期為6個月。應(yīng)用時為了準(zhǔn)確也可以使用比濁儀但一定要防止麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管未搖勻或已過期失效。

在微生物學(xué)檢驗(yàn)中,麥?zhǔn)媳葷岱ǔW鳛榧?xì)菌鑒定、實(shí)驗(yàn)配制菌液時大致判斷細(xì)菌菌液濃度的一種方法,通常認(rèn)為,如將配細(xì)菌菌液濃度配成0.5麥?zhǔn)媳葷峁軙r,相當(dāng)于1.0×108細(xì)菌數(shù)/ml,由于方法本身就是一種估計的方法,所以盡管不同細(xì)菌大小差異很大,但除了真菌孢子,細(xì)菌的差別不大,結(jié)果不會有影響。

附孢子菌懸液制作方法:

1. 菌種活化

將保藏菌接種在PDA斜面培養(yǎng)基試管中,培養(yǎng)7d~14d,使生成大量孢子。未制備孢子懸液時,不得拔去棉塞。每打開1支只供制備1次懸液,每次制備孢子懸液必須使用新培養(yǎng)的霉菌孢子。

2. 孢子懸液制備

在上述PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無菌蒸餾水,用無菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮霉菌孢子,將孢子懸液置于250mL錐形瓶內(nèi),然后注入40mL洗脫液。

錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10?!?5粒與孢子混合,具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團(tuán)的孢子散開,然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中,用離心機(jī)分離沉淀孢子,去上清液。再加入40mL洗脫液,重復(fù)離心操作3次。制成濃度為(0.8~1.2)×106spores/mL的霉菌孢子懸液。若需要精確計數(shù),則可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液,用血球計數(shù)板計數(shù)。孢子懸液應(yīng)在當(dāng)天使用,若不在當(dāng)天使用應(yīng)在 3℃~7℃保存,并盡量在4d內(nèi)使用。


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