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Fast Pfu DNA Polymerase(貨號(hào):HKE031-02B | 規(guī)格:250U ×5)

英文名稱(chēng):Fast Pfu DNA Polymerase

貨 號(hào) :HKE031-02B

規(guī) 格 :250U ×5

用途:用于要求保真度比較高的PCR反應(yīng)

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產(chǎn)品名稱(chēng):Fast Pfu DNA Polymerase
中文名稱(chēng):快速Pfu DNA聚合酶

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格:

編號(hào)產(chǎn)品名稱(chēng)規(guī)格產(chǎn)品介紹產(chǎn)品價(jià)格
HKE031-02BFast Pfu DNA Polymerase250U ×5快速Pfu DNA聚合酶 

產(chǎn)品描述:本制品是通過(guò)采用分子進(jìn)化技術(shù)對(duì)普通Pfu酶進(jìn)行改造而獲得的 新型Fast Pfu酶,是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶解決了高保真PCR反應(yīng)中Pfu酶擴(kuò)增靈敏度低、延伸速度緩慢的難題,能夠高效、快速擴(kuò)增≤6kb片段目的基因片段(最長(zhǎng)可達(dá)20kb),模板低至0.05ng, 并且在DNA末端補(bǔ)平、全基因合成、引入突變等之中有著很好的應(yīng)用。

產(chǎn)品特點(diǎn):
      高保真:保真度高于Pfu酶,為普通Taq酶的50倍。
      快速高效:Fast Pfu擴(kuò)增速度為普通Pfu酶的數(shù)倍,72℃保溫30秒可延伸1kb以上。擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá)20kb,能高效擴(kuò)增≤6kb片段。
      高靈敏:可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出1.2kb特定基因片段,擴(kuò)增性能顯著優(yōu)于普通Pfu酶。
      獨(dú)特配方的 5×Buffer:使PCR 擴(kuò)增反應(yīng)更加穩(wěn)定、靈敏、高效。

產(chǎn)品用途:用于要求保真度比較高的PCR反應(yīng),包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成、DNA末端補(bǔ)平等,也用于復(fù)雜模板, 高GC/AT 模板的擴(kuò)增。

使用建議:(Fast Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平末端,無(wú)3′端"A"突出, 除使用環(huán)凱PCR一步定向克隆試劑盒(Cat. No: HKNR001)外, 其它PCR 產(chǎn)物的克隆方案有:)
      1)PCR前引物進(jìn)行5′端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物磷酸化處理后再直接克隆于平末端的載體中。
      2)將產(chǎn)物3′末端加A后再與T載體連接。
      3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加引物的長(zhǎng)度,理想的引物長(zhǎng)度為20~30mers。另外為了減少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解,盡量在冰上配制反應(yīng)體系,并最后加入Fast Pfu DNA聚合酶。

應(yīng)用實(shí)例:圖例一)50μL 擴(kuò)增體系中,λDNA 為模板,擴(kuò)增 1kb~20kb 片段。

50μL 擴(kuò)增體系中,λDNA 為模板,擴(kuò)增 1kb~20kb 片段。

泳道 M:λ/Hind III DNA Marker; 
泳道 1:1kb;
泳道 2:2kb;
泳道 3:4kb;
泳道 4:6kb; 
泳道 5:8kb;
泳道 6:10kb; 
泳道7:12kb;
泳道 8:20kb

保存溫度:-20℃。

產(chǎn)品包裝(A 包裝):

產(chǎn)品包裝(A 包裝)

活性定義:在74℃條件下,30 分鐘內(nèi)催化 10nmol dNTPs 摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個(gè)單位。。

常用反應(yīng)體系(50μL):

常用反應(yīng)體系(50μL)

常用PCR 循環(huán):

常用PCR 循環(huán)

注意事項(xiàng):
      1)對(duì)高 GC 含量模板,建議將變性溫度提高到 98℃。
      2)對(duì)于高 GC 模板,建議配套使用 PCR 增強(qiáng)劑 I(Cat. No: HKE050)和 PCR 增強(qiáng)劑 II(Cat. No: HKE051),或者添加終濃度為 5%-8% DMSO。

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