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English

Simple Cloning T-vector(pSC-T) (規(guī)格:20次 | 貨號(hào):HKT001-01A)

英文名稱:Simple Cloning T-vector(pSC-T)

貨 號(hào) :HKT001-01A

規(guī) 格 :20次

用途:專用 T 載體

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微生物圖冊(cè)
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產(chǎn)品名稱:Simple Cloning T-vector(pSC-T)

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格:

編號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品介紹價(jià)格
HKT001-01ASimple Cloning T-vector(pSC-T)20次T載體540

產(chǎn)品描述:
      Simple Cloning T-vector(pSC-T)是一種 PCR 產(chǎn)物高效 TA 克隆的專用 T 載體,本載體消除了 PCR 產(chǎn)物插入?yún)^(qū)域兩側(cè)的 多克隆位點(diǎn)。
      在 PCR 克隆構(gòu)建過程中,為了進(jìn)一步的克隆步驟,常會(huì) 在PCR 產(chǎn)物的兩端引入專門的酶切位點(diǎn),如 T 載體上已帶有 相同的酶切位點(diǎn),會(huì)對(duì)下一步的酶切連接帶來不利的影響。為 消 除 多 克 隆 酶 切 位 點(diǎn) 帶 來 的 負(fù) 作 用 , Simple Cloning T- Vector去除了PCR 產(chǎn)物插入?yún)^(qū)域兩側(cè)所有的酶切位點(diǎn)。帶有酶 切位點(diǎn)的 PCR 產(chǎn)物克隆后進(jìn)行酶切時(shí),T 載體上不會(huì)有相同 的酶切位點(diǎn)影響酶切反應(yīng),可以大大提高酶切效率,增加亞 克隆成功率。多克隆位點(diǎn)的消除并不影響 β-半乳糖苷酶的正 常表達(dá),PCR 產(chǎn)物克隆后仍可以利用 α-互補(bǔ)性進(jìn)行藍(lán)白斑篩 選,挑選陽性克隆。
      由于本載體上消除了多克隆酶切位點(diǎn),在 PCR 擴(kuò)增引物設(shè) 計(jì)時(shí)需要考慮導(dǎo)入合適的酶切位點(diǎn)。

Simple Cloning T-vector(pSC-T) 產(chǎn)品包裝(A包裝):

Simple Cloning T-vector(pSC-T) 產(chǎn)品包裝(A包裝)

操作方法:
      1) 選擇合適的連接體系(詳細(xì)介紹見背面)。
      2) 取10μL 加入至 100μL 感受態(tài)細(xì)胞中,用移液 槍吹打混合,冰上放置30 分鐘。
      3) 將離心管置于 42℃水浴中,熱擊 60-90 秒,迅 速將離心管置于冰上,放置 2-3 分鐘。
      4) 向每個(gè)離心管中加入 500μL 無菌不含抗生素的 LB 或SOC 培養(yǎng)基中,37℃搖床,150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘,使質(zhì)粒上氨芐抗性基因表達(dá),菌體復(fù)蘇。
      5) 吸取200μL 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含氨芐 青霉素的 LB 或SOC 固體平板上,用無菌涂布棒將細(xì) 胞均勻涂開,將平板置于 37℃培養(yǎng)箱里直至液體完全 吸收,倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。
      6) PCR檢測(cè),利用試劑盒自帶的高速PCR擴(kuò)增試 劑2×FastTaq Mast Mix直接進(jìn)行菌落PCR鑒定。

pSC-T 結(jié)構(gòu)圖

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