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2×pSC-T vector Fast Ligation Mix(規(guī)格:20次 | 貨號(hào):HKT004-01A)

英文名稱:2×pSC-T vector Fast Ligation Mix

貨 號(hào) :HKT004-01A

規(guī) 格 :20次

用途:專用 T 載體

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微生物圖冊
行業(yè)應(yīng)用
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產(chǎn)品名稱:2×pSC-T vector Fast Ligation Mix

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格:

編號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品介紹價(jià)格
HKT004-01A2×pSC-T vector Fast Ligation Mix20次T載體540

產(chǎn)品描述:
      Simple Cloning T-vector 是一種 PCR 產(chǎn)物高效 TA 克隆 的專用 T 載體,它由 pUC18 載體改造而成,去除了 PCR 產(chǎn) 物插入?yún)^(qū)域兩側(cè)所有的酶切位點(diǎn)。PCR 產(chǎn)物克隆后如果使 用其兩端的酶切位點(diǎn)進(jìn)行酶切時(shí),T載體上不會(huì)有相同的酶 切位點(diǎn)影響酶切反應(yīng),可以大大提高酶切效率,增加亞克隆 成 功率。多克隆位點(diǎn)的消除并不影響 β-半乳糖苷酶的正常表 達(dá),PCR 產(chǎn)物克隆后仍可以利用 α-互補(bǔ)性進(jìn)行藍(lán)白斑篩選, 挑選陽性克隆。
      傳統(tǒng)T 載體在進(jìn)行連接時(shí)的操作程序是:載體、片段、 T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在傳統(tǒng)模 式上將除了插入片段的各成分進(jìn)行預(yù)混,并使其在穩(wěn)定性、 轉(zhuǎn)化子數(shù)目、陽性率方面不低于傳統(tǒng)模式,使用時(shí)只需加入插入片段即可,大大簡化了操作過程,降低了配制連接體系 過程中的誤差和污染率,節(jié)省了時(shí)間。

2×pSC-T vector Fast Ligation Mix 產(chǎn)品包裝(A包裝):

2×pSC-T vector Fast Ligation Mix 產(chǎn)品包裝(A包裝)

操作方法:

1) 快速連接反應(yīng)體系:

組分體積
2×pSC-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL)10μL
目的PCR 片段/ Control Insert DNAX μL/1μL
ddH2O至 20μL

反應(yīng)條件:16℃或 25℃下,保溫15至30分鐘。
      注:保溫5分鐘也能正常進(jìn)行連接反應(yīng),但反應(yīng)效率略 為降低。25℃下進(jìn)行連接,其效果略差于16℃下連接效果。 而更高的溫度(>26℃)則較難形成環(huán)狀DNA。

2)取10μL加入至100μL感受態(tài)細(xì)胞中,用移液槍吹打 混合,冰上放置30分鐘。 
3)將離心管置于42℃水浴中,熱擊60-90秒,迅速將離 心管置于冰上,放置2-3分鐘。 
4)向每個(gè)離心管中加入500μL無菌不含抗生素的LB 或SOC培養(yǎng)基中,37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘,使 質(zhì)粒上氨芐抗性基因表達(dá),菌體復(fù)蘇。
5)吸取 200μL 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含氨芐青霉素的 LB 或 SOC 固體平板上,用無菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于 37℃培 養(yǎng)箱里直至液體完全吸收,倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。
6) PCR 檢測,利用試劑盒自帶的高速PCR 擴(kuò)增試劑 2×FastTaq Mast Mix 直接進(jìn)行菌落PCR 鑒定。

pSC-T結(jié)構(gòu)圖

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