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English

HKV207-01A Biotin Competent Cell(感受態(tài)細(xì)胞)

英文名稱:Biotin Competent Cell

貨 號 :HKV207-01A

規(guī) 格 :100μl×10支

用途:感受態(tài)細(xì)胞

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產(chǎn)品名稱:Biotin Competent Cell
中文名稱:Biotin 感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:

編號產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品介紹價格
HKV207-01ABiotin Competent Cell100μl×10支感受態(tài)細(xì)胞620

產(chǎn)品描述:
      Biotin 修飾的蛋白質(zhì)是用于蛋白質(zhì)相互作用研究中的有力工 具,通過目標(biāo)蛋白融合表達(dá) Avi Tag,可實現(xiàn)位點(diǎn)特異性的 Biotin 修飾,可最大限度的減少對蛋白質(zhì)活性的影響。Avi Tag 的 Biotin 修 飾 可 以 在 體 內(nèi) 或 體 外 ( Avi-Biotinylation Kit , Cat.No : HKPE013)進(jìn)行。Biotin Competent Cell 是含有高表達(dá) Avi Tag 生 物 素 化 酶 的 BL21 ( DE3 ) 感 受 態(tài) 細(xì) 胞 。 配 合 使 用 pAvi-C (Cat.No:HKV104)載體可獲得最佳生物素修飾效果。
      注意:宿主菌為氯霉素抗性。

產(chǎn)品特點(diǎn):
      高效表達(dá) Avi Tag 生物素化酶。
      實現(xiàn)目標(biāo)蛋白 Biotin 修飾。

基因型:E.coli BL21(DE3)來源于 B 株,為 Lon 蛋白水解酶、ompT 外膜蛋白水解酶缺陷型。

轉(zhuǎn)化效率:使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率≥1×10?cfu/μg。

保存溫度:-70℃

Biotin Competent Cell 產(chǎn)品包裝(A包裝):

產(chǎn)品組成體積
Biotin Competent Cell100μl×10 
Control DNA pUC19(1ng/μl)10μl

操作方法:
      1)取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì) 胞的用量為 50-100μl,可根據(jù)實際情況分裝使用。所 用 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞的十分之一,以下 實驗以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
       2)待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加 入目的 DNA(通常 100μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1ng 超螺 旋質(zhì)粒 DNA 所飽和),用移液槍吹打混合,冰上放置 30 分鐘。
       3)將離心管置于 42℃水浴中,熱擊 60-90 秒,迅 速將離心管置于冰上,放置 2-3 分鐘。
       4)向每個離心管中加入 500μl 無菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培養(yǎng)基中,37℃搖床,150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘,使質(zhì)粒上相關(guān)抗性基因表達(dá),菌體復(fù)蘇。
       5)吸取 200μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含氯霉 素和質(zhì)粒上相應(yīng)抗生素的 LB 或 SOC 固體平板上,用 無菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于 37℃培養(yǎng)箱 里直至液體完全吸收,倒置培養(yǎng) 12~16 小時。涂布量 應(yīng)根據(jù)具體實驗調(diào)整,如果轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多,可 取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,如果預(yù)計的克隆數(shù)較少, 可 3000rpm 離心 5 分鐘,吸取部分培養(yǎng)基,懸浮菌體 后涂布在一個平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰 箱中保存,如果第二日轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩余 菌液再涂布在新的平板上。

注意事項:
      1)感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存于-70℃冰箱中,不可反復(fù) 凍融,或放置時間過長,避免感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率降低。
      2)實驗操作時,應(yīng)注意無菌條件。
      3)實驗過程中,可保留部分連接反應(yīng)液,當(dāng)轉(zhuǎn)化 不成功時,可重新轉(zhuǎn)化。

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