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English

HKV208-01A DH5α Competent Cell(感受態(tài)細(xì)胞)

英文名稱:DH5α Competent Cell

貨 號 :HKV208-01A

規(guī) 格 :100μl×10支

用途:感受態(tài)細(xì)胞

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產(chǎn)品名稱:DH5α Competent Cell
中文名稱:DH5α 感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:

編號產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品介紹價格
HKV208-01ADH5α Competent Cell100μl×10支感受態(tài)細(xì)胞281

產(chǎn)品描述:本制品是采用大腸桿菌 DH5α 菌株經(jīng) CaCl2 等處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于質(zhì)粒 DNA 熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α 是一種常用于 質(zhì)粒克隆的菌株,可與載體編碼 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) α 互 補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1 和 endA1 的突變有利于克DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108cfu/μg,適用于高效的質(zhì)粒 DNA 克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

產(chǎn)品特點(diǎn):
      φ80,lacZΔM15 基因產(chǎn)物可與 pUC19 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) α 互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。
      recA1 和 endA1 的突變有利于克隆 DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA 的提取。

基因型:F-,φ80,lacZΔM15,Δ(lacZYA-argF) U169, endA1, recA1, - + - hsdR17(rk ,mk ),SupE44,λ ,gyrA96, relA1,phoA。

轉(zhuǎn)化效率:使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率≥1×10?cfu/μg。

保存溫度:-70℃

DH5α Competent Cell 產(chǎn)品包裝(A包裝):

產(chǎn)品組成體積
DH5α Competent Cell100μl×10 
Control DNA pUC19(1ng/μl)10μl

操作方法:
      1)取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的用量為 50-100μl,可根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。所用 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞的十分之一,以下實(shí)驗(yàn)以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
       2)待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA(通常 100μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和),用移液槍吹打混合,冰上放置30 分鐘。
       3)將離心管置于 42℃水浴中,熱擊 60-90 秒,迅速將離心管置于冰上,放置 2-3 分鐘。
       4)向每個離心管中加入 500μl 無菌不含抗生素的LB 或 SOC 培養(yǎng)基中,37℃搖床,150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘,使質(zhì)粒上相關(guān)抗性基因表達(dá),菌體復(fù)蘇。
       5)吸取 200μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的 LB 或 SOC 固體平板上,用無菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于 37℃培養(yǎng)箱里直至液體完全吸收,倒置培養(yǎng) 12-16 小時。涂布量應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整,如果轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,如果預(yù)計的克隆數(shù)較少,可 3000rpm 離心5 分鐘,吸取部分培養(yǎng)基,懸浮菌體后涂布在一個平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存,如果第二日轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩余菌液再涂布在新的平板上。

注意事項:
      1)感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存于-70℃冰箱中,不可反復(fù)凍融,或放置時間過長,避免感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率降低。
      2)實(shí)驗(yàn)操作時,應(yīng)注意無菌條件。
      3)實(shí)驗(yàn)過程中,可保留部分連接反應(yīng)液,當(dāng)轉(zhuǎn)化不成功時,可重新轉(zhuǎn)化。

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