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HKE366 Cas9(D10A) Nickase(內切酶)

英文名稱:Cas9(D10A) Nickase

貨 號 :HKE366

規(guī) 格 :50μg/盒

用途:內切酶

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產品名稱:Cas9(D10A) Nickase
中文名稱:Cas9(D10A) 內切酶

產品編號與包裝規(guī)格:

編號產品名稱規(guī)格產品介紹價格
HKE366Cas9(D10A) Nickase50μg/盒crispr基因編輯(內切酶)1575

產品描述:
      CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期演化過程中形成的一種適應性免疫防御系統(tǒng),改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在基因的定點修飾中展現出巨大的應用潛能。脫靶效應是目前 CRISPR/Cas9 技術應用的一個難題,在基因編輯應用中,可能會出現難以預測的后果。
      本制品是 spCas9 Nuclease 的一個突變體。Cas9 Nuclease 具有兩個切割活性中心,從而實現在 sgRNA 靶序列特定位點引入 DNA 雙鏈斷裂(DSB)。Cas9(D10A)Nickase 在 Cas9 Nuclease 基礎上突變其中一個切割活性中心,其能在與 sgRNA 靶序列互補的 DNA 鏈 上產生切口,從而形成功能性的單鏈斷裂。Cas9(D10A)Nickase 配合一對 gRNA 使用,可實現 Cas9 Nuclease 相同的基因編輯效果,由于 有效的識別序列由 20 bp 增加至 40 bp,可明顯減少意外的脫靶基因修飾,從而顯著提高 CRISPR/Cas9 技術基因修飾的特異性。

產品特點:純蛋白體系,避免 CRISPR 基因敲除時引入質?;虿《靖蓴_; 可顯著降低脫靶效應。

產品用途:
      1,基于蛋白與 sgRNA 轉染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除;
      2,基于蛋白與 sgRNA 轉染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入;
      3,sgRNA 剪切靶點 DNA 效率檢測,降低體內篩選成本;
      4,體外剪切靶 DNA 的特異位點。

應用實例:圖例)Cas9 D10A Nickase DNA 切割活性檢測:

Cas9 D10A Nickase DNA 切割活性檢測

      帶有靶位點的超螺旋 DNA(cccDNA);
      酶切產生切刻后的開環(huán) DNA(ocDNA);
      50-100ng 酶可有效切割 cccDNA(>95%)。

保存體系:10mM Tris-HCl,300mM NaCl,0.1mM EDTA,50% Glycerol, PH7.4,25℃。

保存溫度:-20℃保存,或-80℃長期保存。

Cas9(D10A) Nickase 產品包裝(A包裝):

產品組成體積
Cas9(D10A)Nickase(0.1μg/μl)500 μL
10×Reaction Buffer1 ml

質量保證:經多次柱純化,SDS-PAGE 膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶,純度達 95%;內毒素含量< 0.1EU/μg;qPCR 方法檢測無大腸桿菌基因組殘留;無 RNase、核酸內、外切酶污染。

體外切割體系(20μL):

Supercoiled DNA200 ng
sgRNA200 ng
Cas9 D10A Nickase50-100 ng
10×Reaction Buffer2 μl
RNase Free WaterTo 20 μl

37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min 
注:在反應體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl,防止RNase 污染。

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* 為 Cas9(H840A)Nickase,能在與 sgRNA 靶序列非互補的 DNA 鏈上產生切口,從而形成功能性的單鏈斷裂,可以減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(D10A,H840A) Nuclease,具有靶 DNA 結合活性,但無切割活性,可用于陰性對照等用途。

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