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培養(yǎng)基不能正常凝固的原因及解決辦法

發(fā)布時間:2024-11-11    瀏覽次數(shù):1613

一、有關(guān)瓊脂的知識

瓊脂,又名瓊膠或凍粉,因最初從日本海藻中提取,故又稱“洋菜”。瓊脂成品為白色或淡黃色粉末狀或細(xì)條形,主要是由復(fù)雜的大分子多糖類物質(zhì)組成。其水解物的組成有40%的D-半乳糖、3%硫酸酯和2%丙酮酸,實際上,它是瓊脂膠和瓊脂糖兩種成分的混合物。瓊脂膠是瓊脂糖的硫酸酯,瓊脂糖主要依靠氫鍵的引力形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。因此,瓊脂糖凝膠的穩(wěn)定性比那些以化學(xué)鍵交聯(lián)而形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝固劑的穩(wěn)定性要差一些。

瓊脂溶于熱水而不溶于冷水,因此在配制培養(yǎng)基時需煮制瓊脂。隨著溫度的升高,瓊脂逐漸溶解,當(dāng)溫度下降到40℃時則開始凝固。配制培養(yǎng)基時應(yīng)注意,由于各地生產(chǎn)的瓊脂的質(zhì)量不同,同樣濃度的瓊脂水溶液凝固后在硬度、透明度及色澤上會有所差異。劣質(zhì)瓊脂不僅凝固性差,而且?guī)в泻芏嚯s質(zhì)。

二、有關(guān)瓊脂凝固性的知識

作為培養(yǎng)基的凝固劑,瓊脂的凝固性除與瓊脂本身的品質(zhì)有關(guān)外,還會受到滅菌溫度、滅菌時間、瓊脂量和pH值的影響。

(1)0.7%~0.8%的瓊脂水溶液在冷卻后會很好凝固,對于常用的微生物培養(yǎng)基,瓊脂的用量基本趨于穩(wěn)定,通常條狀瓊脂的用量約為2%,粉狀瓊脂的用量為1%~1.5%。

(2)培養(yǎng)基的酸堿度對瓊脂的凝固性影響很大,是瓊脂在正常濃度范圍內(nèi)能否凝固的關(guān)鍵因素,當(dāng)4.30<ph<10.05時,瓊脂水溶液均可正常凝固,超過此范圍,瓊脂的凝固性變差,培養(yǎng)基不能正常凝固。

(3)在4.30<ph<10.05范圍內(nèi),瓊脂的凝固性受高溫高壓(1.1kg cm2,120℃)的影響很小,延長高溫高壓滅菌時間或反復(fù)高溫高壓處理均不會影響其凝固性。pH較高(5.0-8.0)時,瓊脂濃度是影響凝固等級的主要因素。

(4)當(dāng)配制的固體培養(yǎng)基pH低于3.44時,其凝固性會受到滅菌溫度、滅菌時間、瓊脂量和pH值的影響。其中滅菌溫度、滅菌時間與瓊脂凝固性呈負(fù)相關(guān),瓊脂量、pH值與瓊脂凝固性呈正相關(guān)。但在這些因素中,瓊脂量的影響不是很大,因此在該類培養(yǎng)基的滅菌過程中應(yīng)該重點把握好滅菌溫度、滅菌時間和pH值。使用較低的滅菌溫度,較短的滅菌時間,適當(dāng)?shù)卦黾优囵B(yǎng)基的pH值就可以顯著提高瓊脂的凝固性。pH較低(≤4.0)時,pH是影響凝固等級的主要因素。


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