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FZ006BF2 志賀氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48test

英文名稱:Rapid Detection Kit for Shigella (Fluorescent Probe Assays)

貨 號 :FZ006BF2

規(guī) 格 :48測試/盒

用途:用于食品中志賀氏菌的定性檢測

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產品名稱:志賀氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
英文名稱:Rapid Detection Kit for Shigella (Fluorescent Probe Assays)

產品編號與包裝規(guī)格:

編號 規(guī)格
FZ006BF248 測試/盒

產品簡介:本試劑盒僅適用于食品中志賀氏菌的定性檢測,其他試驗需另按照國標《GB4789-2012食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗》開展。

檢測原理:基于Real Time PCR技術,利用針對于志賀氏菌特異性基因的引物、熒光探針以及其他反應所需試劑,加入待檢樣品即可進行擴增反應。在發(fā)生擴增過程中,熒光探針與目的基因片段結合,可被Taq酶分解并產生熒光信號,此時熒光定量PCR儀可識別該熒光信號,同時根據(jù)其強弱變化繪制出相應的實時擴增曲線,進而判定志賀氏菌是否檢出。

志賀氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產品組分:

志賀氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產品組分

儲存條件與保質期:-20℃避光儲存,有效期為12個月,避免反復凍融。

靈敏度:最低檢驗限達到100 CFU/Test

所需其他材料和適用儀器:熒光定量PCR儀(具有能夠檢測FAM標記的熒光通道)、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。

志賀氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南:

1,樣品前處理

   1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備:
         a) 取25 g待檢樣品置于225 mL志賀氏菌增菌肉湯中,36 ℃±1 ℃前增菌10~12 h;
         b) 取以上增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min離心5 min,完全去除上清;
         c) 加入30 μL裂解液充分懸浮管底沉淀,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱10 min;
         d) 12000 r/min離心15 min,上清即為待測樣品DNA,靜置冰上,長時間不用應再次離心。

   2) 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落,充分懸浮于預先加有30 μL裂解液的無菌離心管中,后按照上述步驟c)、d)操作。

2, 加樣、反應

   1) 按照需求取n個PCR反應管(n=1管陰性對照+待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照),從試劑盒中取出預混液,充分融化,渦旋后短暫離心,以上每管加入20 μL預混液,待用。
   2) 向上述n個反應管中分別加入陰性對照、待測樣品DNA、陽性對照各5 μL,總反應體積為25 μL。蓋緊管蓋,短暫離心,立即進行PCR擴增反應。
   3) PCR反應體系為25 μL,取FAM檢測通道,在反應階段2中60℃時收集熒光信號,具體程序如下:

反應階段 溫度 時間 信號收集 循環(huán)數(shù)
195°C30 sec 1
295°C5 sec } 40
60°C30 sec?
   注:在反應階段2中60℃時收集熒光信號,對于多通道熒光PCR儀,取熒光素“FAM”為信號采集通道,淬滅基團選擇“None”,染料校正選擇“None”。

3, 結果:一般情況下,可通過軟件自動設定的基線、閾值等直接讀取檢測結果。如需調整,可根據(jù)所使用儀器的自身情況(如噪聲等)以及選取的不同熒光通道進行調整。

   1) 質量控制:陰性對照未出現(xiàn)明顯的S型擴增曲線或Ct值>35,陽性對照出現(xiàn)S型擴增曲線且其Ct值<30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件,則本次檢測結果無效,應重新檢測或與產品技術支持聯(lián)系。

   2) 結果判讀:(根據(jù)反應所得Ct值判讀,具體見下表:)

Ct值 結果判讀
≤35志賀氏菌陽性。
35~37建議重新檢測,若結果Ct≥37,則志賀氏菌陰性,反之則為志賀氏菌陽性。
≥37志賀氏菌陰性。

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