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HKE035系列 2×Fast Pfu Master Mix(Quick Load)

英文名稱:2×Fast Pfu Master Mix(Quick Load)

貨 號 :HKE035系列

規(guī) 格 :1ml | 1ml× 5

用途:用于要求保真度比較高,擴增長度較長的PCR反應

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商品詳細
說明書
微生物圖冊
行業(yè)應用
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產(chǎn)品名稱:2×Fast Pfu Master Mix(Quick Load)
中文名稱:2倍快速Pfu酶預混液(Quick Load)

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:

編號產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品介紹產(chǎn)品價格
HKE035-01A2×Fast Pfu Master Mix1ml2倍快速Pfu酶預混液 
HKE035-01B1ml× 5 
HKE035-02A2×Fast Pfu Master Mix(Quick Load)1ml 
HKE035-02B1ml× 5 

產(chǎn)品描述:本制品是將PCR反應所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液以及優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,預先配制成2倍濃度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix專為擴增克隆DNA片段優(yōu)化,高保真,錯誤率僅為1.3×10-6。使用時只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進行PCR反應,非常方便。較普通Pfu酶,2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高靈敏度、抗干擾強等特點,能獲得更理想的擴增結(jié)果, 并大幅度縮短擴增反應時間,非常適用于1-20kb長片段的擴增。

產(chǎn)品特點:
      高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,為普通Taq酶的50倍。
      靈敏:可從0.05ng人基因組DNA模板中擴增出特定基因片段。
      快速高效:Fast Pfu擴增速度為普通Pfu酶的數(shù)倍,72℃保溫30 秒可延伸1kb以上,可在較短時間內(nèi)獲得高產(chǎn)量的PCR產(chǎn)物(圖例一)。
      快捷:PCR反應所必需試劑全集于一管之中,數(shù)分鐘即可完成反應體系配制。

產(chǎn)品用途:用于要求保真度比較高,擴增長度較長的PCR反應,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成等。

使用建議:(Fast Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端,無3′端"A" 突出,除使用環(huán)凱PCR一步定向克隆試劑盒(Cat. No: HKNR001) 外,其它PCR產(chǎn)物的克隆方案有:)
      1)PCR前引物進行5′端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中。
      2)將產(chǎn)物3′末端加A后再與T載體連接。
      3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設計引物時應適當增加引物的長度, 理想的引物長度為20-30mers。另外為了減少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解,盡量在冰上配制反應體系。

應用實例:圖例一)50μL 擴增體系中,λDNA 為模板, 擴增 1kb~20kb 片段。

50μL 擴增體系中,λDNA 為模板,擴增 1kb~20kb 片段。

泳道 M:λ/Hind III DNAMarker; 
泳道 1:1kb;
泳道 2:2kb;
泳 道 3:4kb; 
泳 道 4:6kb; 
泳道 5:8kb;
泳道 6:10kb; 
泳道 7:12kb;
泳道 8:20kb。

保存溫度:-20℃。

產(chǎn)品包裝(A 包裝):

產(chǎn)品包裝(A 包裝)

質(zhì)量保證:經(jīng)檢測無外源核酸酶殘留;qPCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留;能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

常用反應體系(50μL):

常用反應體系(50μL)

常用PCR 循環(huán):

常用PCR 循環(huán)

注意事項:
      1)需溶解完全后使用,防止離子濃度不均勻。
      2)對高GC含量模板,建議將變性溫度提高到98℃。
      3)對于高GC模板,建議配套使用PCR萬能增強劑 I(Cat.No: HKE055)或者添加終濃度為5%-8% DMSO。

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