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2×Fast Pfu Master Mix(貨號:HKE035-01A | 規(guī)格:1ml)

英文名稱:2×Fast Pfu Master Mix

貨 號 :HKE035-01A

規(guī) 格 :1ml

用途:用于要求保真度比較高,擴(kuò)增長度較長的PCR反應(yīng)

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產(chǎn)品名稱:2×Fast Pfu Master Mix
中文名稱:2倍快速Pfu酶預(yù)混液

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:

編號產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品介紹產(chǎn)品價格
HKE035-01A2×Fast Pfu Master Mix1ml2倍快速Pfu酶預(yù)混液 

產(chǎn)品描述:本制品是將PCR反應(yīng)所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液以及優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,預(yù)先配制成2倍濃度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix專為擴(kuò)增克隆DNA片段優(yōu)化,高保真,錯誤率僅為1.3×10-6。使用時只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進(jìn)行PCR反應(yīng),非常方便。較普通Pfu酶,2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高靈敏度、抗干擾強(qiáng)等特點(diǎn),能獲得更理想的擴(kuò)增結(jié)果, 并大幅度縮短擴(kuò)增反應(yīng)時間,非常適用于1-20kb長片段的擴(kuò)增。

產(chǎn)品特點(diǎn):
      高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,為普通Taq酶的50倍。
      靈敏:可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出特定基因片段。
      快速高效:Fast Pfu擴(kuò)增速度為普通Pfu酶的數(shù)倍,72℃保溫30 秒可延伸1kb以上,可在較短時間內(nèi)獲得高產(chǎn)量的PCR產(chǎn)物(圖例一)。
      快捷:PCR反應(yīng)所必需試劑全集于一管之中,數(shù)分鐘即可完成反應(yīng)體系配制。

產(chǎn)品用途:用于要求保真度比較高,擴(kuò)增長度較長的PCR反應(yīng),包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成等。

使用建議:(Fast Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端,無3′端"A" 突出,除使用環(huán)凱PCR一步定向克隆試劑盒(Cat. No: HKNR001) 外,其它PCR產(chǎn)物的克隆方案有:)
      1)PCR前引物進(jìn)行5′端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中。
      2)將產(chǎn)物3′末端加A后再與T載體連接。
      3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設(shè)計(jì)引物時應(yīng)適當(dāng)增加引物的長度, 理想的引物長度為20-30mers。另外為了減少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解,盡量在冰上配制反應(yīng)體系。

應(yīng)用實(shí)例:圖例一)50μL 擴(kuò)增體系中,λDNA 為模板, 擴(kuò)增 1kb~20kb 片段。

50μL 擴(kuò)增體系中,λDNA 為模板,擴(kuò)增 1kb~20kb 片段。

泳道 M:λ/Hind III DNAMarker; 
泳道 1:1kb;
泳道 2:2kb;
泳 道 3:4kb; 
泳 道 4:6kb; 
泳道 5:8kb;
泳道 6:10kb; 
泳道 7:12kb;
泳道 8:20kb。

保存溫度:-20℃。

產(chǎn)品包裝(A 包裝):

產(chǎn)品包裝(A 包裝)

質(zhì)量保證:經(jīng)檢測無外源核酸酶殘留;qPCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留;能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

常用反應(yīng)體系(50μL):

常用反應(yīng)體系(50μL)

常用PCR 循環(huán):

常用PCR 循環(huán)

注意事項(xiàng):
      1)需溶解完全后使用,防止離子濃度不均勻。
      2)對高GC含量模板,建議將變性溫度提高到98℃。
      3)對于高GC模板,建議配套使用PCR萬能增強(qiáng)劑 I(Cat.No: HKE055)或者添加終濃度為5%-8% DMSO。

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