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GB4789.11-2014 β型溶血性鏈球菌檢驗(yàn)及其注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間:2024-06-12      瀏覽次數(shù):1046    分享:

β型溶血性鏈球菌的生物學(xué)特性

β型溶血性鏈球菌:鏈球菌屬中一類在血平板上能形成β型溶血圈的細(xì)菌,以釀膿(或A群)鏈球菌及無(wú)乳(或B群)鏈球菌為主。

生物學(xué)特性:革蘭氏陽(yáng)性菌,呈球形或橢圓形,呈鏈狀排列,長(zhǎng)短不一,從4-8個(gè)至20-30個(gè)菌細(xì)胞組成不等,鏈的長(zhǎng)短與細(xì)菌的種類及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。該菌不形成芽孢,無(wú)鞭毛,需氧或兼性厭氧菌,營(yíng)養(yǎng)要求較高。

流行學(xué)特征:廣泛分布于自然界、人及動(dòng)物糞便和健康人的鼻咽部??赏ㄟ^(guò)直接接觸、空氣飛沫傳播或通過(guò)皮膚、粘膜傷口感染,被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會(huì)對(duì)人類進(jìn)行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位β型常成為食品污染的污染源。

對(duì)人毒力較強(qiáng),產(chǎn)生β型溶血的A群鏈球菌引起化膿性感染、中毒性疾病及超敏反應(yīng)性疾病。產(chǎn)生β型溶血的B群鏈球菌能引起牛乳房炎,嚴(yán)重危害畜牧業(yè),該菌也能感染人類,尤其是新生兒可引起敗血癥、腦膜炎、肺炎等,死亡率極高,并可產(chǎn)生神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。

β型溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)

 

操作注意事項(xiàng)

1:當(dāng)對(duì)易產(chǎn)生較大顆粒的樣品(如肉類)進(jìn)行檢測(cè)時(shí),建議使用帶 濾網(wǎng)均質(zhì)袋,以方便均質(zhì)后用吸管吸取勻液;
2:使用均質(zhì)袋進(jìn)行前增菌時(shí),應(yīng)使用帶有底托的均質(zhì)袋架子,防止培養(yǎng)過(guò)程中前增菌袋子歪倒泄漏污染培養(yǎng)箱;
3:在使用VITEK2 Compact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行鑒定時(shí),應(yīng)結(jié)合其他生物學(xué)特性綜合評(píng)價(jià)后判斷結(jié)果。如遇待測(cè)菌鑒定評(píng)分過(guò)低,多個(gè)生化反應(yīng)結(jié)果不符貨48h生化反應(yīng)仍不明顯的情況,應(yīng)考慮鏈球菌乳化程度不夠,呈顆粒狀,不能形成均勻的菌懸液有關(guān),此時(shí)應(yīng)重復(fù)試驗(yàn)或改用其它方法鑒定;
4:培養(yǎng)箱中疊放培養(yǎng)皿時(shí),為防止中間平皿過(guò)熱,高度不得超過(guò)6個(gè)平板。

培養(yǎng)基原理解析

1、改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基 (mTSB)

? 胰蛋白胨、植物蛋白胨提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;葡萄糖提供碳源;磷酸氫二鉀為緩沖劑;氯化鈉維持均衡的滲透壓;多粘菌素及萘啶酮酸用于抑制非鏈球菌的生長(zhǎng)。

2、哥倫比亞CNA血平板
? 酵胰酪蛋白胨、動(dòng)物組織 蛋白消化液、酵母提取物、牛肉提取物、淀粉提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;羊血是細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的良好營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。在45~50℃的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血液可以保存血液中某些不耐熱的生長(zhǎng)因子,同時(shí)血球不被破壞。瓊脂是凝固劑,多粘菌素B、萘啶酸能抑制雜菌生長(zhǎng)。

灰白色、半透明、光滑、圓形邊緣整齊菌落,具有無(wú)色透明的溶血環(huán)

生化鑒定原理解析

1、觸媒試驗(yàn)
? 大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶,但鏈球菌屬陰性,故常用此試驗(yàn)來(lái)鑒定。
? 結(jié)果判讀:立即產(chǎn)生氣泡+,不產(chǎn)生氣泡-。
? 不宜用血平板上生長(zhǎng)的菌落,因紅細(xì)胞含有過(guò)氧化氫酶,可致假陽(yáng)性反應(yīng)。

β型溶血性鏈球菌 觸酶+

2、鏈激酶試驗(yàn)
? 健康人的血漿中含有一種酶原,稱為胞漿原。胞漿原在正常狀態(tài)下不活動(dòng),如被溶血性鏈球菌產(chǎn)生的激活酶作用后,胞漿原即變?yōu)榛顒?dòng)性的胞漿素,能溶解纖維蛋白。
? 結(jié)果判讀:血漿混合物凝固后36±1℃繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),凝塊重新溶解為陽(yáng)性。

質(zhì)量控制及疑難解析

質(zhì)量控制

1、實(shí)驗(yàn)室過(guò)程中,每批預(yù)增菌液、選擇性增菌液、分離平板等都要做空白對(duì)照。以掌握檢驗(yàn)過(guò)程中是否存在來(lái)自檢驗(yàn)環(huán)境的污染。

2、定期使用β型溶血性鏈球菌ATCC19615或相應(yīng)定量活菌參考品,在P2實(shí)驗(yàn)室或陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)室內(nèi),用適當(dāng)?shù)氖称窐悠愤M(jìn)行陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,污染劑量應(yīng)控制在10-100CFU/25g,并進(jìn)行記錄,驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)至少每2個(gè)月進(jìn)行1次。

3、每2個(gè)月將所使用的培養(yǎng)基和生化試劑用的標(biāo)準(zhǔn)菌株或陰性菌株進(jìn)行驗(yàn)證,并進(jìn)行記錄。

疑難解析

問(wèn):在前增菌或選擇性增菌結(jié)束后,肉湯未見(jiàn)微生物生長(zhǎng),是否可以終止實(shí)驗(yàn)?
答:不可以,因?yàn)槿鉁梢?jiàn)的細(xì)菌濃度為107CFU/ml,在此濃度一下,肉眼不能發(fā)現(xiàn)微生物生長(zhǎng),但實(shí)際溶液中有微生物生長(zhǎng)。

問(wèn):β型溶血性鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌是一種菌嗎?
答:是的,同一種不同名稱。 

問(wèn):β型溶血性鏈球菌為什么要在厭氧條件下培養(yǎng)?
答:厭氧條件下哥倫比亞CAN選擇性瓊脂平板更適合溶血性鏈球菌的分離培養(yǎng),主要表現(xiàn)為菌落形態(tài)典型、溶血現(xiàn)象更為明顯,同時(shí)抑制了需氧菌及干擾菌的生長(zhǎng)。 

所需培養(yǎng)基試劑

用途

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

024051

胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)

250g/瓶

024051P1

胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)

250g/瓶

SR0310

改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基配套試劑

10支/盒

024066

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基

250g/瓶

SR0420

哥倫比亞CNA血瓊脂配套試劑

10支/盒

CP0910

哥倫比亞CAN血平板

90mm×20個(gè)

養(yǎng)

024061

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基

250g/瓶

CP0160

哥倫比亞血平板

90mm×20個(gè)

生化鑒定

029180

革蘭氏染色液

10mL×4瓶

029270

凍干草酸鉀兔血漿

10支/盒

029280

0.25%氯化鈣溶液

10支/盒

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