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食品中雙歧桿菌檢驗的解決方案 GB 4789.34-2012

發(fā)布時間：2014-10-31 瀏覽次數(shù)：6755 分享：

我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監(jiān)測單位檢驗雙歧桿菌的需求及情況，對雙歧桿菌檢驗相應的培養(yǎng)基進行了改進，使得雙歧桿菌檢出率較之前有很大的改進。擴充并完善了相關的微生物檢測試劑，使得技術(shù)操作人員能更準確、快捷的檢測出目標菌。

現(xiàn)我公司，依據(jù)GB 4789.34-2012食品衛(wèi)生微生物學檢驗雙歧桿菌檢驗，推出成套的雙歧桿菌檢驗解決方案，為生產(chǎn)企業(yè)及檢驗單位提供方便。

GB 4789.34-2012雙歧桿菌檢驗流程圖

圖1：GB 4789.34-2012雙歧桿菌檢驗流程圖

表1：實驗操作所用培養(yǎng)基及生化試劑

功能階段	實驗序號	產(chǎn)品序號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	類別
稀釋液	1	CP0630	生理鹽水	225mL×10袋	盒（袋裝）
平板分離	2	027330	雙歧桿菌瓊脂培養(yǎng)基（BBL瓊脂培養(yǎng)基）	250g	瓶（干粉）
生理生化	3	029010	革蘭氏染色液	10mL×4支	盒
4	029161	過氧化氫酶試劑	2mL×10支	盒（西林瓶）
5	027340	PYG液體培養(yǎng)基基礎	250g	瓶（干粉）
SR0300	PYG液體培養(yǎng)基配套試劑（A、B各一支添加于100 ml基礎培養(yǎng)基中）	2種×5支/盒	盒（西林瓶）
6	027350	TPY液體培養(yǎng)基	250g	瓶（干粉）
7	029010	革蘭氏染色液	10mL×4支	盒
8	029080	甘油	2mL×10支	盒（西林瓶）
9	075060	D-阿拉伯糖	20支	盒（西林瓶）
10	075400	D-核糖	20支	盒（西林瓶）
11	075070	D-木糖	20支	盒（西林瓶）
12	075080	D-半乳糖	20支	盒（西林瓶）
13	075010	D-葡萄糖	20支	盒（西林瓶）
14	075550	D-果糖	20支	盒（西林瓶）
15	075380	D-甘露糖	20支	盒（西林瓶）
16	075110	L-鼠李糖	20支	盒（西林瓶）
17	075100	衛(wèi)矛醇	20支	盒（西林瓶）
18	075120	肌醇	20支	盒（西林瓶）
19	075040	甘露醇	20支	盒（西林瓶）
20	075090	山梨醇	20支	盒（西林瓶）
21	075160	七葉靈（七葉苷）	20支	盒（西林瓶）
22	075140	水楊甙（水楊苷，水楊素）	20支	盒（西林瓶）
23	075570	D-纖維二塘	20支	盒（西林瓶）
24	075030	D-麥芽糖	20支	盒（西林瓶）
25	075020	D-乳糖	20支	盒（西林瓶）
26	075560	D-蜜二糖	20支	盒（西林瓶）
27	075050	D-蔗糖	20支	盒（西林瓶）
28	075530	D-海藻糖（覃糖）	20支	盒（西林瓶）
29	075540	菊糖（菊根粉）	20支	盒（西林瓶）
30	075430	D-松三糖	20支	盒（西林瓶）
31	075230	D-棉籽糖	20支	盒（西林瓶）
32	075480	淀粉	20支	盒（西林瓶）
33	075420	D-松二糖	20支	盒（西林瓶）

GB 4789.34-2012食品衛(wèi)生微生物學檢驗雙歧桿菌檢驗操作步驟

1 樣品制備

1.1 樣品的全部制備過程均應遵循無菌操作程序。

1.2 以無菌操作稱取25 g(mL)樣品，置于裝有225 mL 生理鹽水的滅菌錐形瓶內(nèi)，制成1:10 的樣品勻液。

2 稀釋及涂布培養(yǎng)步驟

2.1 用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1.0 mL，沿管壁緩慢注于裝有9 mL 生理鹽水的無菌試管中(注意吸管尖端不要觸及稀釋液)，振搖試管或換用1 支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。

2.2 另取1 mL 無菌吸管或微量移液器吸頭，按5.2.1 操作順序，做10 倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋一次，即換用1 次1 mL 滅菌吸管或吸頭。

2.3 根據(jù)待鑒定菌種的活菌數(shù)，選擇三個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1 mL 稀釋液，用L棒在雙歧桿菌瓊脂平板進行表面涂布, 每個稀釋度作兩個平皿。置36 ℃±1 ℃ 溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h±2 h，培養(yǎng)后選取單個菌落進行純培養(yǎng)。

3 純培養(yǎng)

挑取3 個或以上的菌落接種于雙歧桿菌瓊脂平板，厭氧，36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng)48 h。

4 鏡檢及生化鑒定

4.1 涂片鏡檢

雙歧桿菌菌體為革蘭氏染色陽性，不抗酸、無芽孢，無動力，菌體形態(tài)多樣，呈短桿狀、纖細桿狀或球形，可形成各種分支或分叉形態(tài)。

4.2 生化鑒定

過氧化氫酶試驗為陰性。選取純培養(yǎng)平板上的三個單個菌落，分別進行生化反應檢測，不同雙歧桿菌菌種主要生化反應見國標附錄B。

5 有機酸代謝產(chǎn)物測定

氣相色譜法測定雙歧桿菌的有機酸代謝產(chǎn)物, 見國標附錄C。

6 報告

根據(jù)鏡檢及生化鑒定的結(jié)果(4)、雙歧桿菌的有機酸代謝產(chǎn)物乙酸與乳酸微摩爾之比大于1(5)，報告雙歧桿菌屬的種名。

相關國標下載地址：

GB 4789.34 —x 食品安全國家標準食品微生物學檢驗雙歧桿菌的鑒定

http://www.qsenn.com.cn/show/28475.html

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